目的：破骨细胞（OCs）数量增加或者骨吸收功能增强时，可引起骨质疏松症、肿瘤骨转移、骨关节炎、Paget骨病等多种由于骨量过度丢失而所致的疾病。传统药物如二磷酸盐类、降钙素、雌激素和选择性雌激素受体调节剂等尽管均能一定程度上治疗OCs相关疾病，但仍可能发生骨坏死以及肿瘤等并发症。草乌甲素在临床上有较强的镇痛及明显的抗炎作用，本研究旨在明确草乌甲素对破骨细胞、成骨细胞分化及钛颗粒介导骨丢失的影响。
方法：通过C57BL6小鼠获得骨髓来源的巨噬细胞（BMMs）,MTS法排除草乌甲素对BMMs的毒性作用，在含不同草乌甲素浓度的破骨细胞诱导培养基中培养至破骨细胞形成，TRAP染色，显微镜下计数破骨细胞并拍照，同时通过Real-timePCR检测破骨细胞相关基因，在mRNA表达水平进行验证；行牛骨片骨吸收实验，扫描电镜分析骨片表面骨陷窝形成，验证草乌甲素对破骨细胞骨吸收功能的抑制作用；通过WB明确其影响破骨细胞骨吸收的分子信号通路，包括SRC-PI3K-AKT、MAPK、NF-kB等信号通路。后经全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞，通过MTT法检测排除草乌甲素对其毒性作用,并于加入成骨诱导液后第10天行碱性磷酸酶染色、第21天行茜素红染色以排除草乌甲素在成骨方面的
n-iso抑制作用。最后使用钛颗粒介导颅骨骨吸收模型，分组建模并处理后，取出颅骨，行micro-CT及HE、TRAP染色。
结果：破骨细胞分化实验中，在草乌甲素浓度为2.5jjlM时破骨细胞数量明显减少，5
jlM时破骨细胞形成显著受到抑制，10弘M时基本无明显破骨细胞分化形成；RT-PCR结果显示破骨细胞相关基因的表达随着草乌甲素浓度的升高而减少；在体外骨片骨吸收实验中，草乌甲素处理后骨陷窝所占骨片面积减小；WB实验显示草乌甲素处理组其p-IkBa活化、IkBa降解较对照组减少，p-p65较对照组表达减少。草乌甲素在明显抑制破骨细胞的浓度下对BMCs的增殖无抑制，并且碱性磷酸酶染色及茜素红染色提示其对BMCs向成骨细胞诱导过程及成骨能力有增强的作用。颗粒介导颅骨骨吸收模型显示在药物组草乌甲素明显抑制了骨丢失。
结论：草乌甲素通过NF_kB通路浓度依赖性地抑制了破骨细胞分化及体外、体内骨吸收的同时促进成骨细胞的矿化。
草乌甲素；骨溶解；破骨细胞；成骨细胞
